II. Электронная микроскопия

Многие структуры клеточки находятся за пределами разрешающей возможности светового микроскопа. Длина волны видимой части диапазона лежит в границах от 0,4 до 0,7 мкм, наибольшее разрешение, приобретенное при всем этом при помощи светового микроскопа, может составлять 0,2 мкм. Открытие волновых параметров, присущих электронам, послужило основой для сотворения нового класса устройств — электрических микроскопов.

Наибольшее разрешение, которое может II. Электронная микроскопия быть получено в их при особых критериях, составляет 0,2 нм, а повышение может достигать 100— 200 тыс. раз.

Механизмы работы электрического микроскопа

Принципная схема построения изображения в световом и электрическом микроскопах сходна. Но существует ряд различий: в электрических микроскопах источником электронов служит катод, входящий в состав электрической пушки, в качестве линз употребляются электрические II. Электронная микроскопия катушки. В связи с тем, что в воздухе электроны могут просачиваться на малозначительные расстояния, а потом их скорость угасает, в электрическом микроскопе при помощи особых насосов создается высочайший вакуум (10~4 мм рт. ст.).

В колонне микроскопа (тубусе), из которой откачан воздух, поочередно размещены катод (вольфрамовая нить), анод (железная пластинка II. Электронная микроскопия с отверстием в центре), магнитные линзы, люминесцентный экран, фотопластинки ("магазин").

Ток, проходя через вольфрамовую нить катода, нагревает ее и вызывает эмиссию электронов. Поданное на катод высочайшее напряжение делает огромную разность потенциалов меж катодом и анодом, что обеспечивает движение электронов к аноду и дальше вниз по колонне микроскопа. Электрический II. Электронная микроскопия пучок поначалу фокусируется первой магнитной линзой — конденсорной. Большая часть электронов, проходя через объект, не отклоняется. Электроны, прошедшие через объект, фокусируются 2-ой магнитной линзой — беспристрастной, которая дает увеличенное изображение объекта. Это изображение опять возрастает третьей магнитной линзой—проекционной.

При всем этом электроны, которые проходят через объект, вызывают свечение экрана II. Электронная микроскопия, покрытого люминофором, а отклонившиеся электроны не доходят до экрана и не вызывают свечения. Изображение, приобретенное на люминесцентном экране, можно сфотографировать, если поднять экран, под которым размещен фотомагазин с фотопластинками, чтоб пучок электронов попал на фотопластинку.

II A. Подготовка материала для электронно-микроскопического исследования

Подготовка к электронно-микроскопическому исследованию содержит в себе II. Электронная микроскопия те же этапы, что и при светооптической микроскопии, но с рядом особенностей.

Взятие материала нужно проводить как можно резвее, маленькими объемами (менее 1 мм3).

Фиксацию производят, обычно, глутаральдегидом, отлично стабилизирующим белки, с следующей дофиксацией в тетраоксиде осмия, который выравнивает фосфолипиды, на холоде в течение нескольких часов. После фиксации материал промывают буферным II. Электронная микроскопия веществом, обезвоживают спиртами растущей концентрации.

Уплотнение и заливку создают при помощи полимеризующейся консистенции (эпоксидные консистенции). Для этого эталоны материала кладут в формы, заливают эпоксидкой и помещают в термостат, где происходит полимеризация смолы.

Для изготовления срезов (шириной 30—50 нм) употребляют ультратомы, в каких подача блока с объектом на недвижный ножик II. Электронная микроскопия осуществляется при помощи термического расширения несущего стержня. В качестве ножей используют специально приготовленные сколы стекла либо алмазов. Получаемые при всем этом поочередные серийные срезы сползают с ножика в виде лент на поверхность воды в прикрепленной к ножику ванночке, откуда их нужно перенести на сеточки.

Контрастирование (либо окрашивание) срезов II. Электронная микроскопия проводят при помощи солей томных металлов (свинца, вольфрама, урана). Находящиеся в этих соединениях элементы с высочайшей атомной массой осаждаются на фосфолипидах клеточных мембран и не пропускают электрический луч, вследствие чего эти участки клеточки смотрятся на дисплее более темными, контрастными по сопоставлению с другими участками, не содержащими фосфолипидов.

Для ориентировки II. Электронная микроскопия в изучаемом объекте употребляют способ производства полутонких срезов (1—2 мкм) с следующим окрашиванием (метиленовым голубым либо толуидиновым голубым). Окрашенный срез рассматривают при помощи микроскопа для определения области, которая должна быть исследована на ультрамикроскопическом уровне, и в предстоящем с этого участка прицельно готовят ультратонкие срезы.


ii-etap-voenizirovannaya-estafeta.html
ii-etapi-raboti-nad-nauchnim-referatom.html
ii-ezotericheskaya-antropologiya.html